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尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)——HPLC法
  • 更新日期:2016-09-09     信息來(lái)源:本站      瀏覽次數(shù):5467
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      對(duì)硝基酚是接觸硝基苯及含對(duì)硝基苯基化合物作業(yè)工人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物。尿中對(duì)硝基酚濃度的測(cè)定,被認(rèn)為是生物學(xué)監(jiān)測(cè)和職業(yè)病診斷的重要指標(biāo)。尿中對(duì)硝基酚的測(cè)定方法有比色法、氣相色譜法及液相色譜法等。比色法操作煩瑣、靈敏度差;氣相色譜法雖然靈敏度高、選擇性好,但是需要將對(duì)硝基酚衍生、操作復(fù)雜、不適于大批樣品分析;近年來(lái)開展環(huán)境樣品和尿液樣品中對(duì)硝基酚檢測(cè)主要使用HPLC方法,但是由于尿液中雜質(zhì)干擾多,導(dǎo)致凈化不好,干擾多,需要增加凈化步驟。

      方法優(yōu)勢(shì)

      迪馬科技開發(fā)的《尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)》,采用固相萃取-液相色譜法測(cè)定人尿中的對(duì)硝基酚,以濃鹽酸作為提取液,采用ProElut PXL 和ProElut Al-N固相萃取柱凈化樣品,通過(guò)HPLC檢測(cè);方法定量限是0.1 mg/kg。本方案前處理步驟簡(jiǎn)單、凈化效果好,基質(zhì)效應(yīng)小且檢測(cè)時(shí)間短;準(zhǔn)確度高,重現(xiàn)性好。

      以下為詳細(xì)解決方案,敬請(qǐng)參考!

      尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)——HPLC法

      1、適用范圍

      本方案適用于尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè),本方法定量限0.1 mg/kg。

      2、提取

      1. 取10 g樣品,加入2 mL濃鹽酸,沸水浴60 min,冷卻至室溫;

      2. 加入25 mL乙酸乙酯振蕩2 min,6000 rpm離心2 min;

      3. 取出上清液在40 ℃水浴條件下,減壓蒸至近干,再加入3 mL 50%甲醇水混勻,待凈化。

      3、凈化—— ProElut Al-N 1 g/6 mL (Cat#:65306)上層

      ProElut PXL 3 mL(Cat#:65920)下層

      a活    化:

      加入5 mL甲醇、5 mL 50%甲醇水,流出液棄去;

      b上    樣:

      將待凈化液加入小柱,流出液棄去;

      c淋    洗:

      加入5 mL 50%甲醇水淋洗小柱,流出液棄去,棄去上層小柱,再用3 mL 50%甲醇水淋洗下層小柱,流出液棄去;

      d洗    脫:

      加入3 mL甲醇,收集洗脫液;

      e重新溶解:

      將洗脫液在40 ℃下減壓蒸至近干,1 mL水溶解殘?jiān)?,過(guò)微孔濾膜供HPLC分析。

      4、色譜條件

      色譜柱:Diamonsil C18(2),250 mm × 4.6 mm,5 μm(Cat#:99603)

      流  速:1.0 mL/min    進(jìn)樣量:20 μL   柱  溫:30 ℃

      檢測(cè)器:UV 360 nm

      流動(dòng)相: A:0.1%甲酸水    B:甲醇    A:B=60:40

      5、添加回收結(jié)果

      人尿中對(duì)硝基酚的HPLC檢測(cè)添加回收結(jié)果

      分析物

      添加水平(mg/kg)

      回收率(%)

      對(duì)硝基酚

      0.1

      82.30

      0.5

      81.69

       

      對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(1.0 mg L)液相色譜圖.jpg

      對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(1.0 mg/L)液相色譜圖

      對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(5.0 mg L)液相色譜圖.jpg

      對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品(5.0 mg/L)液相色譜圖

      添加水平為0.1 mg kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖.jpg

      添加水平為0.1 mg/kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖

      添加水平為0.5 mg kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖.jpg

      添加水平為0.5 mg/kg人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)的液相色譜圖

       人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)(空白樣品)的液相色譜圖.jpg

      人尿中對(duì)硝基酚檢測(cè)(空白樣品)的液相色譜圖

       

      尿液中對(duì)硝基酚的檢測(cè)——HPLC法相關(guān)產(chǎn)品信息:

      貨號(hào)

      名稱

      規(guī)格

      樣品前處理

      65306

      ProElut AL-N

      1 g/6 mL 30/pk

      65920

      ProElut PXL

      3mL 50/pk

      244358

      12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

      12位

      4803

      1,3,6mL柱管通用連接器

      15/pk

      4806

      考克(控制流量)

      15/pk

      99011

      真空/正壓兩用泵,無(wú)油

      1/pk

      99013

      抽濾瓶套裝

      (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)

      1/pk

      30039

      FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

      13 mm,0.22   μm 100/pk

      30040

      FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

      13 mm,0.45   μm 100/pk

      標(biāo)準(zhǔn)品

      12-N-10855-5G

      對(duì)硝基酚[100-02-7]

      5 g

      色譜柱及保護(hù)柱

      99603

      Diamonsil   C18(2) 通用型反相色譜柱

      250 × 4.6 mm,5 μm

      6201

      EasyGuard C18 保護(hù)柱

      10 × 4.0 mm 1/pk

      2個(gè)柱芯+1個(gè)柱套

      HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對(duì)試劑

      50102

      甲醇    HPLC級(jí)

      4 L

      50104

      乙酸乙酯 HPLC級(jí)

      4 L

      50144

      甲酸    HPLC級(jí)

      50 mL

      通用色譜產(chǎn)品

      52401B

      瓶架/藍(lán)色(現(xiàn)貨)

      50孔

      52401A

      瓶架/白色(現(xiàn)貨)

      50孔

      1034

      樣品瓶(棕色/螺紋)

      2 mL,   100/pk

      1035

      樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝)

      100/pk

      H80465

      HPLC 進(jìn)樣針

      25 μL

      紅色產(chǎn)品貨號(hào)#30039、#30040、#1034、#1035*

       

    北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

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