液相色譜柱是高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)的核心部件，其性能直接影響分離效果和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。色譜柱價(jià)格昂貴且易受損傷，因此科學(xué)養(yǎng)護(hù)至關(guān)重要。以下是從使用前準(zhǔn)備、流動(dòng)相管理、樣品處理到日常維護(hù)的全流程養(yǎng)護(hù)細(xì)節(jié)，旨在延長色譜柱壽命并保障數(shù)據(jù)可靠性。
一、使用前準(zhǔn)備與安裝
1. 檢查柱狀態(tài)
- 新柱或久存柱需用配套溶劑(如甲醇或乙腈)沖洗10-20倍柱體積，置換存儲(chǔ)溶劑并排除氣泡。
- 觀察柱入口篩板是否清潔，避免固體顆粒堵塞。
2. 正確安裝
- 確保柱方向與流動(dòng)相流向一致(通常標(biāo)記為“→”)。
- 使用專用接頭，避免螺紋過度擰緊導(dǎo)致柱體變形。
二、流動(dòng)相的管理
1. 溶劑純度與過濾
- 流動(dòng)相需采用HPLC級(jí)溶劑，水相需經(jīng)0.45μm濾膜過濾并超聲脫氣。
- 緩沖鹽應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，避免微生物滋生或沉淀生成。
2. pH值控制
- 反相柱(如C18柱)流動(dòng)相pH范圍通常為2-8，pH(如強(qiáng)酸性或堿性)會(huì)溶解固定相硅膠基質(zhì)。
- 正相柱(如硅膠柱)避免高水相比例，防止硅膠水解。
3. 梯度洗脫后處理
- 完成梯度洗脫后，需用初始溶劑(如甲醇-水)平衡15-30分鐘，清除強(qiáng)保留組分。
- 若使用高比例有機(jī)溶劑(如純乙腈)，結(jié)束后需切換至低濃度有機(jī)相過渡，防止固定相塌陷。
三、樣品處理與進(jìn)樣規(guī)范
1. 樣品前處理
- 樣品需經(jīng)0.22μm濾膜過濾或離心(10,000rpm以上)，去除顆粒物。
- 樣品濃度適中，避免過載(通常單次進(jìn)樣量不超過柱容量的1%-5%)。
2. 進(jìn)樣方式優(yōu)化
- 自動(dòng)進(jìn)樣器需定期清洗進(jìn)樣針，避免交叉污染。
- 手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)避免氣泡引入，進(jìn)樣速度均勻。
3. 避免強(qiáng)吸附樣品
- 離子型或極性大分子易吸附在固定相表面，導(dǎo)致柱效下降。可通過添加離子對(duì)試劑(如TFA)或調(diào)整流動(dòng)相極性改善。
四、操作條件控制
1. 流速與壓力限制
- 嚴(yán)格遵守色譜柱額定流速(如C18柱通常為0.5-1.5mL/min)，超限會(huì)加速篩板損壞。
- 柱壓突然升高可能由堵塞或顆粒物引起，需立即停機(jī)排查。
2. 溫度穩(wěn)定性
- 恒溫控制(通常25-30℃)可減少流動(dòng)相黏度波動(dòng)，提升保留時(shí)間重現(xiàn)性。
- 避免柱溫驟變，防止固定相結(jié)構(gòu)破壞。
五、日常維護(hù)與存儲(chǔ)
1. 沖洗與再生
- 每日使用后用低粘度溶劑(如甲醇或乙腈-水)沖洗30分鐘，清除殘留物質(zhì)。
- 若柱效下降，可用異丙醇或四氫呋喃反向沖洗再生(需參考柱說明書)。
2. 長期存儲(chǔ)
- 反相柱：存儲(chǔ)于甲醇-水(如50:50)或純甲醇中，避免純水導(dǎo)致硅膠干燥開裂。
- 正相柱/HILIC柱：存儲(chǔ)于正己烷或乙腈-水(含少量甲醇防霉)。
- 密封兩端，存放于陰涼避光處(如冰箱)。
3. 記錄與追蹤
- 記錄柱批次號(hào)、使用次數(shù)、樣品類型及柱壓變化，便于追溯性能衰減原因。
六、常見問題與應(yīng)急處理
1. 柱效下降
- 可能原因：樣品污染、固定相流失或篩板堵塞。
- 處理：反向沖洗、更換篩板或再生色譜柱。
2. 鬼峰與基線漂移
- 可能原因：流動(dòng)相不純或緩沖鹽析出。
- 處理：更換新鮮溶劑并沖洗系統(tǒng)。
3. 柱壓過高
- 可能原因：顆粒堵塞或柱床干涸。
- 處理：反向沖洗或拆卸檢查篩板。
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